應廣大用戶朋友的需求，我們將陸續(xù)推出《藥品微生物檢驗問答集錦》系列，本文章為系列第三篇。本系列所列出的問題均是藥品微生物檢驗過程中提問頻次較高的問題，我們咨詢專家老師后匯編，希望可以幫助藥品微生物檢驗從業(yè)人員對檢驗過程中遇到的問題有新的理解。大家對感興趣的、比較關(guān)注的問題，也可以留言，我們一起交流探討！

1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基培養(yǎng)后如果有霧狀或者絮狀物質(zhì)出現(xiàn)但不能確定是否是微生物生長，需要如何判斷？

  參照《中國藥典2015版1101無菌檢查法》，如在加入供試品后或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁，或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。

2.只用做無菌檢查用的FTM和TSB的培養(yǎng)基適用性檢查是否可以不用對照培養(yǎng)基？

  嚴格按照藥典來說，可以選擇不用。但是既然有對應的對照培養(yǎng)基，建議選擇參比用于培養(yǎng)基的質(zhì)量控制。

3.在瓊脂培養(yǎng)基制備過程中，發(fā)現(xiàn)滅菌后的培養(yǎng)基制成的平板部分偏軟甚至有不凝固的現(xiàn)象，是什么原因？

  主要是瓊脂分布不均導致的。建議瓊脂類培養(yǎng)基滅菌前加熱溶解均勻（如果是大體積配制進行分裝滅菌的培養(yǎng)基，建議煮沸溶解，攪拌分裝）；滅菌后，使用前，關(guān)注培養(yǎng)基的透光性是否均一，如果不均一，輕輕搖晃使其均勻，再傾注平皿使用。

4.平板在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)后，平板干裂，縮水是什么原因？如何避免？
  平皿干裂縮水，與瓊脂的保水性、傾注培養(yǎng)基的量、平皿的透氣性、培養(yǎng)箱條件等因素均有關(guān)系。
  a.瓊脂：不同的瓊脂在保水性方面略有差異，保水性差的瓊脂可能會出現(xiàn)嚴重縮水或者干裂。
  b.培養(yǎng)基的量：傾注的培養(yǎng)基越少，平板越薄越容易干裂。按照GB4789要求，傾注融化的培養(yǎng)基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少為3 mm（直徑90 mm的平皿，通常要加入18 mL～20 mL瓊脂培養(yǎng)基）。如果平板需儲存，或者培養(yǎng)時間超過48 h或培養(yǎng)溫度高于40 ℃，則需要傾注更多的培養(yǎng)基。
  c.平皿的透氣性：平板的密封性越好，保存和培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基失水越少。雖然增加平板的密封性可以減少水份流失，但并非密封性越高越好，一些需氧型微生物（如銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌等），在密閉環(huán)境中生長較差，需要良好的透氣性才能較好的生長。
  d. 培養(yǎng)條件：培養(yǎng)箱是影響平皿干裂問題的關(guān)鍵因素之一。大型的培養(yǎng)箱為了保證內(nèi)部溫度均一，通常帶有較強的鼓風系統(tǒng)，內(nèi)部有較強的空氣流動。而氣流越強，則越容易導致平皿失水。而對于一些沒有鼓風系統(tǒng)的小型培養(yǎng)箱，則很少會出現(xiàn)平皿干裂現(xiàn)象。在培養(yǎng)箱內(nèi)擺放平皿時，應盡量避開風口氣流大的位置，同時遠離培養(yǎng)箱內(nèi)部發(fā)熱板。
  綜上所述，在遇到平板干裂縮水問題時，可通過增加平板培養(yǎng)基厚度、培養(yǎng)箱內(nèi)增加擋板降低氣流或避開風口、選擇合適透氣性的平皿、選擇適宜瓊脂的的培養(yǎng)基等進行綜合的考慮分析，制定對應的方案和措施。

5.滅菌后的瓊脂培養(yǎng)基，是否可以在恒溫箱或者恒溫水浴鍋過夜或更長時間存放？對培養(yǎng)基性能會有影響嗎？

  《GB4789.28 -2013培養(yǎng)基的試劑和質(zhì)量要求》標準中指出，融化后的培養(yǎng)基放入47～50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫(可根據(jù)實際培養(yǎng)基凝固溫度適當提高水浴鍋溫度)，直至使用，培養(yǎng)基達到47℃～50℃的時間與培養(yǎng)基的品種、體積、數(shù)量有關(guān)。融化后的培養(yǎng)基應盡快使用，放置時間一般不應超過4 h。
  《中國藥典2015版 9203藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導原則》中指出融化的固體培養(yǎng)基應置于45～50℃的環(huán)境中，不得超過8小時。
  長時間的保溫可能會造成培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分流失，靈敏度下降，培養(yǎng)效果變差，瓊脂的凝膠強度降低等情況，保溫過夜或更長時間這種操作方法不是很規(guī)范。一般建議在滿足試驗安排的情況下，恒溫存放的時間越短越好。

6.滅菌后的瓊脂培養(yǎng)基若未用完，可以下次再重新融化繼續(xù)使用嗎？

  《GB4789.28 -2013培養(yǎng)基的試劑和質(zhì)量要求》標準中指出，含有活性化學物質(zhì)或不穩(wěn)定性成分的固體培養(yǎng)基也應即配即用，不可二次融化；因此對于一些已添加抗生素、卵黃、血清等不穩(wěn)定成分的培養(yǎng)基，不可以再次融化使用。而對于一般的培養(yǎng)基（未開封啟用），可使用沸水浴或采用有相同效果的方法使培養(yǎng)基融化，再次融化后未用完的培養(yǎng)基則不能重新凝固留待下次使用。

原文鏈接：交流分享II藥品微生物檢驗常見問題問答集錦（三）。