建立支原體培養(yǎng)基靈敏度檢査（變色單位試驗法）及供試品檢查方法。除藥典推薦培養(yǎng)基外，亦可使用可支持支原體生長的其他培養(yǎng)基，但靈敏度必須符合要求。

培養(yǎng)基與菌種對應(yīng)關(guān)系如下表。

器具

（1）試管：螺口旋蓋試管，利于培養(yǎng)時保持密閉；或者普通玻璃中試管，滅菌時使用硅膠塞，培養(yǎng)時換成橡膠塞；或者培養(yǎng)時使用無菌液體石蠟液封。

（2）新生牛血清。

（3）滅菌柜、生物安全柜、生化培養(yǎng)箱等。

培養(yǎng)基配制

（1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基：按標(biāo)簽所示配制方法制備，分裝8mL/支，滅菌，待用。

（2）完全培養(yǎng)基：臨用前每支8mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入2mL新生牛血清。

注：半流體培養(yǎng)基在使用前應(yīng)煮沸10?15分鐘，冷卻至56°C左右，然后加入新生牛血清（培養(yǎng)基：血清為 8：2），并可酌情加入適量抑菌劑（青霉素等），充分搖勻。基礎(chǔ)培養(yǎng)基，2-8℃可保存3個月。

菌液制備

將菌種接種于適宜的支原體培養(yǎng)基中，經(jīng)36C±1℃密閉培養(yǎng)至培養(yǎng)基變色, 盲傳兩代。
  接種時建議做梯度稀釋，選取剛變色的培養(yǎng)物進(jìn)行下步試驗。（培養(yǎng)時間太久，支原體容易死亡）

接種及培養(yǎng)

選取變色的新鮮培養(yǎng)物，接種至待檢培養(yǎng)基中，做10倍系列稀釋，肺炎支原體稀釋至 10^-7~10^-9，接種在支原體肉湯/半流體培養(yǎng)基內(nèi)；口腔支原體稀釋至10^-3~10^-5，接種在精氨酸支原體肉湯/半流體培養(yǎng)基內(nèi)。每個稀釋度接種3支試管，置36°C±1°C密閉培養(yǎng)7?14天，觀察培養(yǎng)基變色結(jié)果。

結(jié)果判定

以接種后培養(yǎng)基管數(shù)的 2/3 以上呈現(xiàn)變色的最高稀釋度為該培養(yǎng)基的靈敏度。
    靈敏度應(yīng)達(dá)到：
    支原體肉湯/半流體培養(yǎng)基：肺炎支原體應(yīng)達(dá)到10^-8；精氨酸支原體肉湯/半流體培養(yǎng)基：口腔支原體應(yīng)達(dá)到 10^{- 4}。